Иммуноблоттинг – диагностическое мероприятие, проводимое в лабораторных условиях, по результатам которого выявляют антитела к возбудителям различных заболеваний. Одним из таковых выступает вирус иммунодефицита человека. Сразу стоит отметить, что такое исследование, как иммуноблоттинг на ВИЧ – это дополнительное мероприятие, которое назначают для подтверждения положительного результата ИФА.
В каких случаях назначается анализ
Вирус иммунодефицита человека – медленно прогрессирующая инфекция. Со времени проникновения в организм патогенов и до проявления первой симптоматики часто проходит достаточно продолжительное время, которое может достигать нескольких лет.
На начальном этапе развития клинические проявления могут отсутствовать. Повышение общей температуры, недомогание, боль в горле, характерные ВИЧ-инфекции симптомы, человек путает с банальной простудой, а ведь инфекция продолжает прогрессировать. Поэтому специалисты ВИЧ-центров рекомендуют пройти комплексную диагностику в таких случаях:
- если случился незащищенный половой акт с новым партнером;
- если одноразовый медицинский шприц или иглу использовали повторно;
- если недавно была нанесена татуировка или проведен пирсинг;
- если обнаружена другая инфекция, путь передачи которой – половой (например, сифилис, бактериальный вагиноз, гонорея);
- если произошел контакт с инфицированным человеком.
Иммуноблот на ВИЧ проводится с использованием сыворотки или плазмы крови. Исследование на одном стрипе требует 1,5-2 мл крови или 15-25 мкл сыворотки.
Диагностическое мероприятие позволяет выявить антитела не только к вирусу иммунодефицита человека, но и к другим патогенам. В ходе исследования используют специальные наборы, характерные для различных заболеваний, например:
- ВПГ1 и ВПГ2 IgM/IgG (для выявления герпесвирусной инфекции);
- TORCH-профиль IgM (для выявления токсоплазмоза, краснухи, цитомегаловирусной инфекции, ВПГ 1 и ВПГ 2);
- ВЭБ IgMTIgG (для выявления вирусной инфекции Эпштейн-Барр);
- ВГС IgG (для выявления вирусного гепатита типа С).
Результат иммуноблоттинга может быть положительным (когда обнаружены антитела) и отрицательным (когда антитела в биологическом материале отсутствуют), а также неопределенным, ложноположительным и ложноотрицательным.
Иммуноблоттинг на ВИЧ является важным методом диагностики, который позволяет подтвердить наличие антител к вирусу. Врачи отмечают, что этот тест обладает высокой специфичностью и чувствительностью, что делает его надежным инструментом в клинической практике. Процедура проведения иммуноблоттинга включает в себя выделение белков вируса и их последующую реакцию с сывороткой пациента. Врачи подчеркивают, что правильная интерпретация результатов требует учета клинической картины и истории болезни пациента. Положительный результат не всегда означает активную инфекцию, поэтому важно проводить дополнительные исследования. Специалисты рекомендуют проводить тестирование в специализированных лабораториях, чтобы избежать ложноположительных и ложноотрицательных результатов. В целом, иммуноблоттинг является важным этапом в диагностике ВИЧ и требует внимательного подхода со стороны медицинских работников.
Где можно провериться на заражение вирусом, и что делать дальше
Каждая поликлиника, частная лаборатория, больница, клиника специализируется на подобном диагностическом мероприятии. Пройти тест можно в центре тестирования ВИЧ. Некоторые частные клиники предлагают услуги по консультированию и тестированию вируса СПИДа и ВИЧ на дому.
Рекомендуется провести один тест спустя 6 недель после предполагаемого заражения и спустя 12 недель. Пройти диагностику разрешается и в более поздний срок: на результат это не влияет.
ВАЖНО! После получения результатов исследования нужно обратиться к лечащему врачу для назначения соответствующей терапии.
Положительные пробы
Если результаты иммуноблота положительные, это еще не значит, что в организме развивается ВИЧ-инфекция. Для подтверждения диагноза назначают иные исследования, например, непрямую иммунофлюоросценцию.
Читайте также:
Хоть метод иммуноблота и обладает высокой чувствительностью, однако, за счет определения иммуноглобулинов класса G возможен ложноположительный результат в первые 3 недели после инфицирования. В таком случае проводится тест повторно спустя определенное время.
Все причины получения ложноположительного результата неизвестны. Наиболее распространенными источниками выступают период беременности и недавнее введение вакцины иммунопрепарата. Если по истечении определенного времени после воздействия подобных факторов иммуноблот на ВИЧ все так же положительный, это означает, что человек инфицирован.
Иммуноблоттинг на ВИЧ — это метод, который широко используется для подтверждения диагноза после первичного тестирования на вирус. Люди отмечают, что этот метод обладает высокой специфичностью и чувствительностью, что делает его надежным инструментом в диагностике. Процедура проведения теста включает в себя выделение белков вируса, которые затем фиксируются на мембране и обрабатываются антителами. Это позволяет выявить наличие специфических антител у пациента.
Расшифровка результатов может быть сложной, так как требует знания о том, какие белки соответствуют различным стадиям инфекции. Многие пациенты отмечают, что важно правильно интерпретировать результаты в контексте клинической картины и других тестов. Важно также учитывать, что наличие антител не всегда означает активную инфекцию, поэтому консультация с врачом необходима для понимания итогового диагноза. В целом, иммуноблоттинг считается важным шагом в управлении ВИЧ-инфекцией и помогает людям лучше понять свое состояние.
Негативный результат
Иммуноблот может давать отрицательный результат, что сигнализирует об отсутствии в организме антител к ВИЧ-инфекции и, как следствие, — о полном здоровье.
Отрицательный иммуноблот часто наблюдается в «период окна» (в первые 3 месяца между инфицированием и появлением в крови антител). На протяжении данного срока тест не обнаруживает соответствующие антитела, но в иной жидкости (сперме, влагалищном отделяемом) можно выявить таковые и в большом объеме.
Как проводится анализ
Иммуноблот позволяет идентифицировать антитела путем исследования крови и применения гель-электрофореза.
В первую очередь проводится разрушение бактериальных клеток или вирионов ультразвуком, после чего путем электрофореза – разделение всех антигенов вируса или бактериальных клеток. В итоге получается коммерческий реагент, помещаемый на специальную нитроцеллюлозную пленку.
Во время постановки иммуноблоттинга на материал с известным антигеном наносят и исследуемую сыворотку. После того, как провели инкубацию и отмывание несвязавшихся антител, начинают иммуноферментный анализ, наносят на сыворотку иммуноглобулины, которую помечают ферментом, и хромогенный субстрат, меняющий цвет при контакте с ферментом.
Если имеются антитела, на носителе образуются пятна.
Линейный метод
Линейный блот на ВИЧ – непрямое иммунологическое исследование, методом которого получают качественный показатель аутоантител класса IgG.
Читайте также:
В ходе иммунологического исследования используют вирусное вещество ВИЧ-формата или антигены. В лабораторных условиях соединяют белки ВИЧ и отдельные антитела, которые были получены из сыворотки крови. Далее проводится инкубация путем добавления меченых антител и человеческого иммуноглобулина.
Диагностика ВИЧ у новорожденных
В организме ребенка до 9 месяцев, рожденного от инфицированной женщины, присутствуют антитела к ВИЧ матери, что становится причиной получения ложноположительного результата ИФА. По этой причине предпочтение отдают вирусологическим тестам – количественному анализу РНК и ДНК ПЦР. Более чувствителен культуральный метод диагностики инфекции.
ВАЖНО! Показаниями к проведению диагностических мероприятий по выявлению ВИЧ-инфекции у новорожденных выступают: рождение от инфицированной женщины, получение сомнительного результата ранее осуществимого анализа.
Исследование при беременности
Так как ВИЧ-инфекция, развивающаяся у беременной женщины, может передаться будущему ребенку, требуется ранняя диагностика на вирус иммунодефицита.
В первую очередь проводится иммуноферментный анализ, применяемый в качестве скрининга. Диагностическое мероприятие помогает обнаружить в сыворотке крови антитела к инфекции. Несмотря на точные результаты анализа в период беременности, требуется повторное проведение исследования.
Разновидность ИФА – иммунный блоттинг, который часто используют в период беременности. По результатам диагностики можно выявить антитела к определенным антигенам, которые распределены по молекулярному весу методом электрофореза.
Как правильно пройти тест
Иммунный блоттинг на ВИЧ требует специальной подготовки, как и другие методы диагностики заболевания. Если провести некоторые исследования и получить результаты определенных показателей можно на протяжении всего дня (например, ответ на аллерген), то сдавать кровь на иммунологический анализ нужно только в утреннее время.
В предыдущий день перед диагностикой рекомендуется окончить повышенные физические нагрузки. Биологический материал сдают на голодный желудок. Как правило – это кровь с вены, которую в некоторых случаях забирают в несколько пробирок.
Расшифровка результатов
Расшифровку результатов иммуноблотта проводит лабораторный работник. Если обнаружили 2 из 3 протеинов ВИЧ-1 или ВИЧ-2, это указывает на присутствие в организме соответствующей инфекции. Исследование проводится для подтверждения положительного иммуноферментного анализа. Поэтому реакция проверяется и на такие протеины, как gp120/160, gp41 в сочетании с р24. Последние – это часть трех генов СПИДа — gag pol and env.
Первичная диагностика предполагает исследование белков р25, gp110/120 и gp160, указывающих на раннюю стадию развития заболевания. При положительном результате, который дал второй серологический иммуноферментный анализ, проводится иммуноблот. Если и последний дал положительный результат, диагноз ВИЧ подтверждают.
Читайте также:
Вероятность положительного результата зависит от периода, который прошел от момента инфицирования до проведения диагностики:
- спустя 28 дней – 60-65%;
- спустя 42 дня – 80%;
- спустя 56 дней – 90%;
- спустя 84 дня – 95%.
Ложноположительный результат возможен, если забор биологического материала для дальнейшей диагностики проводился в период беременности, при нарушении гормонального фона, продолжительном подавлении иммунной функции определенными препаратами, которые принимает человек.
Критерии оценки анализа
Результаты анализа ИФА и иммуноблоттинга должны соответствовать следующим критериям:
- блот исследуемого биологического материала совпадает с блотом образца сравнения;
- молекулярная масса основного выявленного компонента соответствует требованиям спецификации.
Выявляемая примесь и ее содержание должны отвечать требованиям свидетельства на стандартный образец.
Неинтерпретируемые результаты
В некоторых случаях иммуноблоттинг на ВИЧ и СПИД не соответствует отрицательному и положительному результату, причем врач не может определить истинную причину сомнительных сведений. Часто причиной неправильной интерпретации выступает инфицирование, вызванное другим серотипом.
Для устранения сомнений ПЦР и ИФА проводятся в динамике. При отсутствии характерной заболеванию симптоматики на протяжении полугода и факторов риска говорят о полном здоровье. На этом этапе диагностические мероприятия оканчивают.
Сомнительный результат также можно получить при развитии в организме иного инфекционного заболевания, ракового новообразования, аллергической реакции.
Важно! При сомнительном результате человек не может быть донором крови и другого биологического материала.
Типичные ошибки при диагностике ВИЧ инфекции
Забор биологического материала, доставка и оформление материалов, используемых при проведении лабораторной диагностики, должны соответствовать следующим правилам:
- Сопроводительная документация оформляется с указанием наименования тест-системы, ее срока годности и серии.
- Полностью указаны паспортные данные обследуемого, дата, место забора биологического материала.
- Сыворотка хранится не дольше установленного срока, для исследования берется допустимый объем биоптатат – не меньше 2-5 мл.
- Номер на флаконе соответствует указанному номеру в направлении.
- Забор биологического материала происходит по установленным правилам, а именно, из локтевой вены. В составе исследуемой крови не должно быть сгустков.
Для забора материала используется сухая пробирка. У новорожденных часто берут пуповинную кровь, указывая о таком факте в направлении.
Читайте также:
Типичная ошибка врачей – хранение полученного материала дольше 12 часов при комнатной температуре и дольше 1 дня при температуре 4-8 градусов выше по Цельсию. За счет наступающего гемолиза искажаются результаты диагностического мероприятия.
Итак, к типичным ошибкам во время проведения диагностики ВИЧ-инфекции относят:
- неправильный забор биологического материала;
- неправильное хранение биоптата;
- неправильная транспортировка диагностических систем;
- длительное хранение тест-системы.
На результат влияет даже качество воды, используемой для промывания тары, в которую помещают биологический материал.
После получения результатов исследования лабораторный работник должен выдать для врача заключение. Если диагностика проводилась в «период окна», он назначает повторное проведение диагностики спустя определенное время. В любом случае, чтобы поставить диагноз «ВИЧ-инфекция», одного иммуноблота недостаточно. Необходима комплексная диагностика.
Вопрос-ответ
Почему ИФА положительный, а иммуноблот отрицательный?
На основании повторного иммуноблота ставится диагноз. Отрицательный результат иммуноблота означает, что человек не инфицирован – даже если до этого несколько ИФА-тестов показали обратное. Положительный результат не оставляет сомнений в наличии ВИЧ-инфекции.
Что означает положительный ifa?
Положительный результат АНА-ИФА с положительным результатом на одно или несколько специфических антител может указывать на наличие определенного аутоиммунного заболевания (таблица 2).
Советы
СОВЕТ №1
Перед проведением иммуноблоттинга на ВИЧ обязательно проконсультируйтесь с врачом. Он поможет вам понять, какие анализы необходимо сдать, и объяснит, как правильно подготовиться к процедуре.
СОВЕТ №2
Обратите внимание на сроки получения результатов. Иммуноблоттинг может занять больше времени, чем другие тесты на ВИЧ, поэтому будьте готовы к ожиданию и не паникуйте, если результаты не будут готовы сразу.
СОВЕТ №3
При расшифровке результатов теста не стесняйтесь задавать вопросы своему врачу. Иммуноблоттинг может быть сложным для понимания, и важно получить полное объяснение всех показателей и их значимости.
СОВЕТ №4
Если результат теста положительный, не бойтесь обратиться за поддержкой. Существуют различные организации и группы поддержки, которые могут помочь вам справиться с эмоциональными и практическими аспектами жизни с ВИЧ.
